PURIFICACIÓN Y CARACTERIZACIÓN PARCIAL DEL PRIMER INHIBIDOR DE CARBOXIPEPTIDASA AISLADO DE PIMIENTO AMARILLO (Capsicum annuum L.)

Abstract

Si bien los inhibidores de proteasas han sido considerados por mucho tiempo como factores anti-nutricionales; estudios recientes han demostrado la capacidad de estas moléculas de resistir el proceso gastrointestinal, atravesar el tracto digestivo y llegar a la sangre de manera intacta. De este modo, podrían ejercer su actividad biológica en sangre y tejidos periféricos como moléculas anticancerígenas, antitrombóticas, antimaláricas y antiangiogénicas, entre otras. Varias de estas actividades biológicas han sido descritas para los inhibidores de metalocarboxipeptidasas (IMCP). Los IMCPs están escasamente investigados en el reino vegetal, la mayoría de ellos pertenece a la familia Solanaceae y poseen características estructurales especiales que les proporcionan una extrema estabilidad biofisicoquímica. En este trabajo reportamos el aislamiento y purificación parcial del primer IMCP aislado de Capsicum annuum al que denominamos YBPCI. El extracto crudo fue parcialmente purificado mediante tratamiento térmico a 100 ºC y posterior cromatografía de afinidad empleando Carboxipeptidasa A inmovilizada en glioxil-agarosa. Los pasos de purificación fueron evaluados mediante el estudio del perfil proteico por SDS-PAGE y cuantificación proteica. El YBPCI presentó un peso molecular de 4 060 Da (valor obtenido mediante espectrometría de masas MALDI-TOF) y una I0.5 de 0.4 µg ml-1. Además, demostramos la estabilidad a la temperatura, fuerza salina y a valores extremos de pH, realizando finalmente un ensayo de simulación gástrica in-vitro y comprobando que el YBPCI mantiene su actividad inhibitoria intacta. Estos resultados alientan el estudio de su potencial actividad biológica, con el fin de emplear dicha molécula como potencial aditivo natural de alimentos, explotando así su capacidad conservante.