CARACTERIZACIÓN DE LAS PROPIEDADES DE UNIÓN IN VITRO DE FaPG1 SOBRE DIFERENTES POLISACÁRIDOS DE LA PARED CELULAR

  • Corel Salinas Instituto de Fisiologia Vegetal (INFIVE), Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales, UNLP -CONICET.
  • Pedro Marcos Civello Instituto de Fisiologia Vegetal (INFIVE), Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales, UNLP -CONICET.
  • Gustavo Adolfo Martínez Instituto de Fisiologia Vegetal (INFIVE), Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales, UNLP -CONICET.
Palabras clave: Poscosecha, Poligalacturonasa, Estabilización

Resumen

El ablandamiento excesivo de los frutos carnosos limita su vida poscosecha influyendo en la preferencia de los consumidores. La firmeza de un fruto está condicionada por varios factores, siendo uno de los principales la rigidez mecánica determinada por la pared celular la cual está constituida por una red de microfibrillas de celulosa inmersas en una compleja matriz de pectinas y hemicelulosas. Durante la maduración, la acción combinada de diferentes proteínas y enzimas hidrolíticas que actúan sobre los componentes de la pared celular provoca una disminución del contenido, solubilización y depolimerización de los distintos componentes. La disminución y relajación de esta barrera mecánica no sólo disminuye la firmeza del fruto sino que también facilita el ataque microorganismos patógenos, lo cual acorta la vida poscosecha del fruto.

En los últimos años se ha acumulado evidencia que indica que el ablandamiento de la frutilla está estrechamente ligado a la degradación de las pectinas, a diferencia de lo que ocurre en otros frutos como tomate. 
La mayoría de las glicosil hidrolasas tienen una arquitectura molecular formada por un sitio catalítico, un módulo de unión a carbohidrato y un péptido señal que las dirige a pared celular. Aún no se han caracterizado las propiedades de unión de FaPG1 a carbohidratos de pared celular ni se ha descripto la existencia de un módulo de unión a carbohidratos o región de unión a pectinas para ninguna poligacturonasa.
En este trabajo clonamos la proteína FaPG1 y dos fragmentos de la misma, RC-FaPG1 (región que contiene el dominio endo-poliglucanasa) y RN-FaPG1 (complementaria a FC-FaPG1), en un vector de expresión en Escherichia coli para obtener las proteínas recombinantes correspondientes. Las tres proteínas recombinantes solubles en buffer con agente caotrópico (Sarkosyl), utilizado en la purificación, precipitaron cuando se intentó remover dicho agente en buffers de distinto pH y fuerza iónica. Únicamente logramos estabilizar dichas proteínas en presencia de su sustrato Ácido poligalacturónico (PGA)  y  de esta forma logramos ensayar la capacidad de unión de cada una de ellas a dicho polímero. Hasta el momento hemos podido concluir:
La proteína completa permaneció estable aún a bajas concentraciones de PGA mientras que el dominio catalítico perdió abruptamente su estabilidad a bajas concentraciones de PGA.
 El fragmento no catalítico permaneció estable a concentraciones aún más bajas de PGA. Esto sugiere una posible interacción de la región no catalítica con el sustrato (PGA).

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Publicado
2019-03-24
Cómo citar
Salinas, C., Civello, P. M., & Martínez, G. A. (2019). CARACTERIZACIÓN DE LAS PROPIEDADES DE UNIÓN IN VITRO DE FaPG1 SOBRE DIFERENTES POLISACÁRIDOS DE LA PARED CELULAR. Investigación Joven, 6(Especial), 28. Recuperado a partir de https://revistas.unlp.edu.ar/InvJov/article/view/6715